產(chǎn)品規(guī)格：1mL（200T） 

儲存條件：4℃避光冷藏，請勿凍存。本產(chǎn)品在推薦條件下可以儲存 6 個月。

光譜特性：Annexin V-PE: Ex/Em = 488/578 nm

產(chǎn)品介紹 

細(xì)胞凋亡早期改變發(fā)生在細(xì)胞膜表面，這些細(xì)胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸( PS )從細(xì)胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外，使PS 暴露在細(xì)胞膜外表面。Annexin V 具有易于結(jié)合 到磷脂類如PS 的特性，對PS 有高度的親和性。因此，該蛋白可充當(dāng)一敏感的探針檢測暴露在細(xì)胞膜表面的PS。 

Annexin V-PE 可以與7-AAD/PI等聯(lián)合使用，來檢測細(xì) 胞凋亡情況。7-AAD/PI 可被排除在活細(xì)胞和早期凋亡細(xì)胞之外，而晚期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞可以同時被Annexin V-PE 和7-AAD結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽性，從而來區(qū)分活細(xì)胞、早調(diào)細(xì)胞與晚凋細(xì)胞。

使用方法 

1. 根據(jù)實驗要求誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。檢測樣品中應(yīng)包含未經(jīng)處理的細(xì)胞樣品，作為陰性對照。此外，設(shè)定一組樣品做單染，用于調(diào)節(jié)補償。 

2. 沉淀細(xì)胞 懸浮細(xì)胞：1000 rpm，4 ℃離心 5 min 沉淀細(xì)胞；貼壁細(xì)胞：用不含 EDTA 的胰酶消化細(xì)胞， 1000 rpm ，4 ℃離心 5 min 沉淀細(xì)胞，胰酶消化時間不宜過長，以防引起假陽性。對于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞無法完全離心至離心管底，可以適當(dāng)延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50 μL 左右的培養(yǎng)液，以避免吸走 細(xì)胞。

注：用胰蛋白酶消化然后使細(xì)胞在最佳細(xì)胞培養(yǎng)條件和培養(yǎng) 基中恢復(fù)約30分鐘，然后在染色。 胰蛋白酶消化會暫時破壞質(zhì)膜，允許Annexin V結(jié)合磷脂酰絲氨酸在細(xì)胞膜的細(xì)胞質(zhì)表面上，從而導(dǎo)致假陽性染色。

3. 加入約1mL 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清。

4. 用適當(dāng)?shù)木彌_液重新懸浮細(xì)胞，調(diào)節(jié)其濃度1-5×10^6/mL （緩沖液可選擇終濃度為 2mM Hepes/NaOH, pH7.4，28mM NaCl，0.5mM CaCl2溶液）。 

5. 取100 μL 的細(xì)胞懸液于5mL流式管中，加入5μL Annexin V-PE 混勻后于室溫避光孵育5分鐘。 

6. 加入10μL 20μg/mL的7-AAD或PI，并加400 μL PBS，立刻進(jìn)行流式檢測。

注意事項： 

1. 熒光染料均存在淬滅問題，保存和使用過程中請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。 

2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。