一、 簡(jiǎn)介 

環(huán)氧活化瓊脂糖凝膠是采用平均粒徑為90μm的6%交聯(lián)瓊脂糖凝膠，表面用大分子糖鏈接枝，使它 有更高的比表面積和更好的生物兼容性，用它合成的親和填料，避免蛋白之間位阻以及蛋白和填料的位 阻干擾，使其同等配基下有更高載量，同時(shí)具有更高的分辨率。由于比表面積大，平衡和洗脫的時(shí)間也 更短。即使是純化病毒、抗體等生物大分子物質(zhì)，載量也基本保持不變。

     產(chǎn)品特點(diǎn)： 

      1、偶聯(lián)條件溫和，偶聯(lián)效率高。

      2、填料不需要處理，直接計(jì)算合適的量用于偶聯(lián)，縮短時(shí)間。

      3、剛性強(qiáng)，流速快。 

      4、可偶聯(lián)含有氨基、巰基、羥基的配基，應(yīng)用范圍廣。

      5、偶聯(lián)后制備的親和填料壽命長(zhǎng)，流速快，特異性高。

二、 填料特性： 

         基質(zhì) 高度交聯(lián)瓊脂糖凝膠 

         適用范圍 帶氨基、巰基、羥基的物質(zhì)（多糖，蛋白，核酸，抗體以及其他物質(zhì)） 

         功能基團(tuán) epoxy 

         配基密度 15-30μmol/ml 

         平均粒徑 90μm

         最大流速 200cm/h

三、操作步驟 

用環(huán)氧活化瓊脂糖凝膠6B偶聯(lián)牛血清白蛋白（BSA）為例： 

1、 取BSA 100mg溶解于10ml的pH9.0 0.25M碳酸鈉緩沖液中； 

2、 用量筒量取環(huán)氧活化瓊脂糖凝膠6B 5-6mL； 

3、 將凝膠加入溶解后的BSA溶液中混合，在搖床上振蕩，25℃偶聯(lián)6h； 

4、 然后加50mg甘氨酸，再反應(yīng)6h，封閉剩余的基團(tuán)。 

5、偶聯(lián)了BSA的填料可以裝在柱子中，然后用1M NaCl溶液洗10個(gè)柱床體積，收集裝柱子的液體以 及清洗柱子的溶液測(cè)定BSA的總量，再用純水沖10個(gè)柱床體積，最后將填料在20%乙醇溶液中保 存。如果是大量的偶聯(lián)，可以選擇G3砂心漏斗或者濾器上按上面的方法清洗，用20倍填料體積， 分3-5次清洗。 

6、BSA的偶聯(lián)量為6 mg/mL。計(jì)算方法：BSA的吸附載量=（G0-G1）/V。 

     G0：BSA總使用量，單位：mg。

     G1：偶聯(lián)反應(yīng)后未偶聯(lián)的BSA的量，單位：mg。  

      V ：填料的體積，單位：mL。  

     備注：該偶聯(lián)方法可用于偶聯(lián)單抗及其它蛋白，均能獲得很好的偶聯(lián)效果。  

環(huán)氧活化的填料的應(yīng)用注意事項(xiàng)： 

1、活化的填料現(xiàn)取現(xiàn)用，以免時(shí)間過長(zhǎng)造成偶聯(lián)活性降低。如果要偶聯(lián)的蛋白不穩(wěn)定，可在搖床上 4℃振搖偶聯(lián)12-16小時(shí)，以維持配基的活性。如果沒有把握可以配相應(yīng)濃度的配基溶液0.5-1ml，分別 選擇不同pH及溫度然后不加填料模擬偶聯(lián)條件，到時(shí)間觀察溶液是否有沉淀，如果有沉淀偶聯(lián)效果就不 好，這時(shí)可以稍微降低pH或溫度，同時(shí)可以加5%左右的甘油或PEG保護(hù)蛋白,避免沉淀，總之對(duì)于任何 配基最好能了解其溶解性及穩(wěn)定性，避免實(shí)驗(yàn)失敗導(dǎo)致?lián)p失。 

2、偶聯(lián)配基后盡快清洗填料，避免在高pH條件中，配基失活。 

3、更穩(wěn)定的配基可以直接溶解于NaOH溶液或者碳酸鈉溶液中進(jìn)行偶聯(lián)，溫度可適當(dāng)提高，偶聯(lián)時(shí) 間則相應(yīng)縮短至1-4小時(shí)。 

4、偶聯(lián)蛋白的最適pH為可以在8.0-10左右，在室溫或4℃均可，溫度與pH的提高均能增加配基的 吸附載量，根據(jù)蛋白的穩(wěn)定選擇合適的pH和溫度，偶聯(lián)蛋白溶液的濃度為5-20mg/ml。填料體積和配基 溶液的體積為1:1.5或者為1:2。 

5、偶聯(lián)的緩沖液包括碳酸鹽、硼酸鹽和磷酸鹽緩沖液，但絕對(duì)不能使用Tris、甘氨酸等含有氨基的 物質(zhì)。

6、只能夠用于體外實(shí)驗(yàn)，不能夠用于臨床、治療和動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)等，由此產(chǎn)生的后果，概不承擔(dān)責(zé) 任。